我校动物重大疫病病原感染和致病机制研究团队在抗PRRSV感染领域取得新进展。将一种细胞穿膜肽（TAT）与纳米抗体Nb6进行融合表达，获得融合蛋白TAT-Nb6。实验表明该融合蛋白可成功进入细胞，并对I型和II型PRRSV毒株均有显著抑制作用。相关论文 “A Nanobody Targeting Viral Non-Structural Protein 9 Inhibits Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Replication” 发表在Journal of Virology上。本文共同第一作者为博士研究生王立珍、张璐和博士后黄柏成，共同通讯作者为陈红英和周恩民教授。

　　猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS），是由PRRS病毒（PRRSV）感染所致的一种猪的急性传染病。现有的疫苗对该病的保护作用非常有限，而且目前还没有抗PRRSV感染的特异药物。因此，新型抗PRRS病毒药物的研发具有重要意义。本研究将一种细胞穿膜肽（TAT）与纳米抗体Nb6进行融合表达，获得融合蛋白TAT-Nb6。首先通过ELISA和pull-down实验，证明了原核表达的TAT-Nb6能够特异性结合PRRS病毒Nsp9。接着利用间接免疫荧光（IFA）、Western-blot和流式细胞术等实验，证明了TAT-Nb6可以进入MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞（PAMs）(图1A)。在抗PRRSV细胞试验中发现，TAT-Nb6对基因I型和II型PRRSV毒株均有抑制作用(图1B)。进一步利用酵母双杂交技术，找到了Nb6 特异性结合Nsp9的区域为Nsp9aa454-551 和Nsp9aa599-646 (图1C)，氨基酸序列比对发现，两种基因型的Nsp9aa454-646同源性为77.7-81.3%。本项研究证明：原核表达的TAT-Nb6能够进入细胞，通过特异性靶向PRRSV非结构蛋白Nsp9实现抗病毒作用。

图1. A）TAT-Nb6进入MARC-145和PAMs细胞中；B）TAT-Nb6对两种基因型PRRSV均有抑制作用；C）TAT-Nb6特异性结合Nsp9的区域为：Nsp9aa454-551 和Nsp9aa599-646。

　　本研究获得国家重点研发计划项(2017YFD0501006, 2016YFD05007)和国家自然基金重点项目(31430084)资助。

　　周恩民教授为动物重大疫病病原感染和致病机制研究团队负责人，团队主要从事PRRSV和动物及人兽共感染戊型肝炎病毒（hepatitis E virus, HEV）的研究。该团队在上述研究领域获得6项国家重点研发计划项目课题以及13项国家自然科学基金项目支持，发表100余篇学术论文。

编辑：张晴

终审：郭建东